凍存的細胞總是受損?復(fù)蘇的細胞存活率低?什么時候適合凍存細胞?復(fù)蘇細胞有什么要注意的?應(yīng)對細胞復(fù)蘇問題我們有妙招!
很多科研人會遇到細胞雖然是活細胞但是不貼壁的情況,這個情況其實很大可能就是凍存操作和復(fù)蘇操作的細節(jié)出了差錯。而要保證細胞凍存和復(fù)蘇不受傷害關(guān)鍵密寶是“慢凍快融”。
什么是“慢凍快融” 慢凍:這一步驟主要是為了防止細胞在冷凍過程中形成冰晶,從而對細胞造成損害。通過緩慢降低溫度,細胞可以逐步脫水,減少胞內(nèi)冰晶的形成,從而保護細胞結(jié)構(gòu)不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結(jié)過程,進一步減少冰晶對細胞的損傷。 速融:在復(fù)蘇過程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態(tài)下對細胞的毒害作用??焖偃诨苁辜毎杆龠M入復(fù)蘇和生長狀態(tài),避免由于緩慢融化導致的水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶,從而對細胞造成損傷。 凍存避坑指南 慢凍:這一步驟主要是為了防止細胞在冷凍過程中形成冰晶,從而對細胞造成損害。通過緩慢降低溫度,細胞可以逐步脫水,減少胞內(nèi)冰晶的形成,從而保護細胞結(jié)構(gòu)不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結(jié)過程,進一步減少冰晶對細胞的損傷。 速融:在復(fù)蘇過程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態(tài)下對細胞的毒害作用??焖偃诨苁辜毎杆龠M入復(fù)蘇和生長狀態(tài),避免由于緩慢融化導致的水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶,從而對細胞造成損傷。 復(fù)蘇操作技巧 復(fù)蘇后注意事項 細胞復(fù)蘇后只有非常少量細胞貼壁,是不是需要重新復(fù)蘇?先不要著急丟掉!可以補加血清和細胞因子,或者每隔 2-3 天換新鮮的生長培養(yǎng)基,經(jīng)過 2-3 次換液后,大部分細胞就能看到明顯增殖,此時再按照正常傳代操作即可。 細胞復(fù)蘇后剛開始已經(jīng)貼壁了狀態(tài)不錯,后面第二天開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,這個情況可能是凍存前細胞消化過度,或者凍存中收凍存液殺害細胞凋亡導致的情況。