【貨號(hào)】 BC-PC-HU-003

【規(guī)格】 5*10⁵個(gè)/T25培養(yǎng)瓶（常溫發(fā)貨）

【保存】 液氮保存，長(zhǎng)期

【產(chǎn)品介紹】

  

【細(xì)胞簡(jiǎn)介】

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。脂肪組織中也存在一些干細(xì)胞群，具有自我更新能力和多向分化潛能，被稱為脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，簡(jiǎn)稱脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比，在來(lái)源、細(xì)胞群特點(diǎn)以及分化潛能等多方面極為相似。但是，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更易獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞，且獲取過(guò)程中對(duì)機(jī)體損傷更小，是更為理想的自體干細(xì)胞源。脂肪組織分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以梭形為主要形態(tài)，BrdU可標(biāo)記其細(xì)胞核。

【收貨后處理】

T25培養(yǎng)瓶常溫運(yùn)輸細(xì)胞

根據(jù)不同細(xì)胞生長(zhǎng)特性，分為以下處理方式：

貼壁細(xì)胞：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中的完全培養(yǎng)基收集至離心管中，留5mL完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，依據(jù)生長(zhǎng)特性進(jìn)行傳代或凍存，具體操作見細(xì)胞傳代和凍存步驟。首次傳代，建議1:2傳代（兩個(gè)T25）。

懸浮細(xì)胞：將T25培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm離心3~5min，丟棄上清，加1~2mL完全培養(yǎng)基重懸，按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至4~5mL/瓶，最后放入37℃、5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

半貼壁、半懸浮細(xì)胞：?對(duì)于半貼壁半懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，懸浮細(xì)胞用離心管收集細(xì)胞懸液，1000rpm離心3~5min，丟棄上清。?貼壁的細(xì)胞未超過(guò)80%匯合度時(shí)，用5mL完全培養(yǎng)基重懸收集到的細(xì)胞沉淀，然后加回原培養(yǎng)瓶中，放入37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。?貼壁的細(xì)胞超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)貼壁細(xì)胞傳代方法使用0.25%胰酶消化收集；將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的沉淀用1~2mL完全培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后，按1:2進(jìn)行分瓶傳代（2個(gè)T25）。

運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

【復(fù)蘇培養(yǎng)】

從液氮中取出細(xì)胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；將凍存管中的細(xì)胞懸液移至含1mL完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，1000 rpm離心3~5min；

棄上清，用4~5mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，接種至T25培養(yǎng)瓶，于37℃、5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，密切觀察細(xì)胞狀態(tài)。

【細(xì)胞傳代】 

細(xì)胞收集：?貼壁細(xì)胞：當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí)，棄去培養(yǎng)瓶或皿中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次，然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養(yǎng)瓶或皿中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，加入與胰蛋白酶消化液等量（或高于消化液的量）的完全培養(yǎng)基終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?懸浮細(xì)胞：直接收集培養(yǎng)瓶或皿中的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細(xì)胞：先參考?收集懸浮細(xì)胞，再參考?收集貼壁細(xì)胞。

離心：收集好的細(xì)胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。

接種：根據(jù)細(xì)胞量以適量的完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，之后按適當(dāng)比例接種到新培養(yǎng)瓶或皿中（細(xì)胞量及培養(yǎng)瓶或皿的規(guī)格可按實(shí)驗(yàn)要求確定）。 

【細(xì)胞凍存】

細(xì)胞收集：?貼壁細(xì)胞：當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí)，棄去培養(yǎng)瓶或皿中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次，然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養(yǎng)瓶或皿中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，加入與胰蛋白酶消化液等量（或高于消化液的量）的完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?懸浮細(xì)胞：直接收集培養(yǎng)瓶或皿中的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細(xì)胞：先參考?收集懸浮細(xì)胞，再參考?收集貼壁細(xì)胞。

離心：收集好的細(xì)胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。

凍存液重懸：可根據(jù)細(xì)胞量（需提前計(jì)數(shù)）向沉淀細(xì)胞加入一定量的配制好的細(xì)胞凍存液（50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%胎牛血清+10%DMSO），混勻后以1mL/管加入凍存管中。

凍存：將凍存管放入裝有異丙醇的的凍存盒中進(jìn)行梯度降溫，然后放入-80℃冰箱降溫，24h后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐中。(若實(shí)驗(yàn)室條件不足，可于冰箱上層4℃放置30min，隨后轉(zhuǎn)移至下層-20℃冷凍2h，接下來(lái)將其放于-80℃超低溫冰箱中過(guò)夜，最終將凍存管放置于液氮中以長(zhǎng)期保存。

【售后依據(jù)】 

收到細(xì)胞后，請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購(gòu)的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況，若有異常請(qǐng)及時(shí)拍照聯(lián)系我們。 

顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（4×，10×，20×各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

【注意事項(xiàng)】

1、收到細(xì)胞后，及時(shí)查看產(chǎn)品介紹，確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，并按照不同生長(zhǎng)特性（貼壁、懸浮、半貼壁半懸浮）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。

2、收到細(xì)胞后建議先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。將其放入37℃培養(yǎng)箱中靜置3~4h后，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中可能會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可先離心培養(yǎng)瓶中的完全培養(yǎng)基收集脫落細(xì)胞，然后加入完全培養(yǎng)基重懸并吹散，加回原培養(yǎng)瓶并補(bǔ)齊培養(yǎng)液，再放到培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

4、如收到密閉培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時(shí)要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

5、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并注意防護(hù)。所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需滅菌后方能丟棄。

6、若細(xì)胞在操作過(guò)程中發(fā)生污染，需對(duì)污染的細(xì)胞進(jìn)行滅活方可丟棄。

7、本庫(kù)的細(xì)胞系（株）僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞系（株）轉(zhuǎn)讓給第三者。

【培養(yǎng)建議】

1、人AMSC體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

2、該細(xì)胞可傳10代左右；6代以內(nèi)狀態(tài)最佳，收到細(xì)胞后應(yīng)盡快完成實(shí)驗(yàn)。

3、注意控制胰酶消化時(shí)間，長(zhǎng)時(shí)間消化會(huì)影響細(xì)胞貼壁及生長(zhǎng)狀態(tài)。-

注：收到貨后務(wù)必三天內(nèi)在4×,10×,20×倍鏡下觀察拍照留存,作為售后依據(jù)，否則默認(rèn)收到貨后狀態(tài)良好。