【貨號】 BI-WB019

【規(guī)格】 100mL

【保存】 -20℃，12個月。

【產(chǎn)品簡介】

Western及IP細(xì)胞裂解液（含抑制劑）是一種常用的細(xì)胞組織快速裂解液，主要成分為20mM Tris（pH7.5），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸鈉，β-甘油磷酸鈉，EDTA，正釩酸鈉，亮肽素等多種抑制劑。Western及IP細(xì)胞裂解液（無抑制劑）裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的WB，IP，co-IP。

【使用方法】

一、對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

 （一）融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

（二）對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2s后，細(xì)胞就會被裂解。

（三）對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50~100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

（四）充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100μL裂解液即可，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加量到150μL或200μL。每100萬細(xì)胞用100μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2~4mg/mL，不同細(xì)胞有所不同。

二、對于組織樣品：

（一）把組織剪切成細(xì)小的碎片。

（二）融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

（三）按照每20mg組織加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

（四）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

（五）充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200μL本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15~25mg/mL，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

（六）如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

【注意事項】

1、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

2、對于某些特殊蛋白的IP，若Western及IP細(xì)胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液（強、中或弱）或NP-40裂解液。如果IP的時候背景很高，則應(yīng)考慮選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液（強或中）。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液 （弱）或NP-40裂解液。

3、對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液（強、中）或SDS裂解液。

4、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。