【貨號】 BI-WB016

【規(guī)格】 100mL

【保存】 -20℃，12個月

【產(chǎn)品簡介】

多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一種極其強烈的細(xì)胞組織快速裂解液并獲得總蛋白質(zhì)。其裂解液強度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、通用細(xì)胞裂解液、Western及IP細(xì)胞裂解液，所獲得的蛋白質(zhì)可以用于Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等。

SDS 裂解液 （無抑制劑）的主要成分為50mM Tris (pH8.1)，1% SDS等，不含焦磷酸鈉，β-甘油磷酸酯，正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA，亮肽素等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。

【使用方法】

對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1、融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

2、對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50~100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μL裂解液即可，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加量到200μL或250μL。每100萬細(xì)胞用100μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2~4mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2、融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

3、按照每20mg組織加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

 4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200μL本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15~25mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

6、如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

【注意事項】

1、需自備PMSF。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。