【貨號】 BI-WB006

【規(guī)格】 100mL

【保存】 -20℃，12個月

【產(chǎn)品簡介】

NP-40 裂解液（無抑制劑）是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。本產(chǎn)品可以用于動物、植物的細(xì)胞或組織樣品，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品。

NP-40 裂解液的主要成分為 Tris(pH7.4)，NaCl，1% NP-40，EDTA 以及磷酸酶抑制劑。用 NP-40 裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。使用本裂解液時，用戶可以根據(jù)具體用途自行添加特定抑制劑。

【使用方法】

1. 對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

(1) 融解 NP-40 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM，或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入適當(dāng)?shù)牡鞍酌噶姿崦敢种苿┗旌衔铩?/span>

(2) 對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細(xì)胞 1~2 s后，細(xì)胞就會被裂解。植物細(xì)胞宜在上裂解 2~10min。

對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，輕輕 vortex 或者彈擊管底以把細(xì)胞盡量分散開。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50~100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

對于細(xì)菌或酵母：對于 1mL 菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗滌一次，充分去除液體后，輕輕 vortex 或者彈擊管底以把細(xì)菌或酵母盡量彈散。加入 100~200 μL裂解液，輕輕 vortex 或者彈擊管底以混勻，冰上裂解 2~10min。如果希望獲得更好的裂解效果，細(xì)菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液進(jìn)行裂解。

裂解液用量說明：通常 6 孔板每孔細(xì)胞或者 1mL 的菌液或酵母液中的細(xì)菌和酵母量加入 150μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 μL或 250 μL。每 100 萬動物細(xì)胞用 100 μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 2~4mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。

(3) 充分裂解后，10000~14000 g 離心 3~5 min ，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

2. 對于組織樣品：

(1) 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

(2) 融解 NP-40 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1 mM，或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入適當(dāng)?shù)牡鞍酌噶姿崦敢种苿┗旌衔铩?/span>

(3) 按照每 20 mg組織加入 150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液進(jìn)行裂解。

(5) 充分裂解后,10000~14000 g 離心 3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

(6) 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器或研磨設(shè)備，缺點(diǎn)是不如勻漿或研磨那樣裂解得比較充分。

【注意事項(xiàng)】

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。

2、如需添加蛋白酶抑制劑等，需自行準(zhǔn)備。

3、需自備PMSF，裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4oC 進(jìn)行。

4、對于某些難溶解蛋白的 Western，如果發(fā)現(xiàn) Western 及 IP 細(xì)胞裂解液 效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如 RIPA 裂解液或 SDS 裂解液。

5、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

6、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。